ZEISS Apotome 一機解決 傳統螢光攝影的困擾
當我們使用高倍率物鏡或觀察較厚的螢光樣本時,總會有部分模糊不清的影像干擾樣本觀察,這是拍攝螢光影像常見的困擾。此現象主要起因於樣品切片太厚或高倍率物鏡景深較淺,在顯微鏡下會同時觀察到聚焦清晰的影像以及離焦模糊的影像。這些離焦模糊的影像大幅降低了清晰度與對比,此情況下我們便無法清晰拍攝出樣品的2D與3D結構。
為擺脫離焦影像的干擾,除了將樣品製作得更極端纖薄外,也可以在顯微鏡上引入光學切片技術(optical sectioning)。光學切片顧名思義就是讓光學影像變得更”薄”,切除離焦的模糊影像、只留下焦平面的清晰影像。顯微鏡上常見的光學切片技術就是共軛焦顯微鏡(confocal microscopy),然而共軛焦顯微鏡造價昂貴、操作複雜、維護成本高,所以通常只安裝於具備專人管理的貴重儀器中心,無法普及到各地的實驗室。
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ZEISS Apotome解決此問題
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不同於共軛焦方法,ZEISS Apotome建構在螢光顯微鏡(wide field microscopy)上,使用”結構式光學照明技術”(structured illumination)產生光學切片,造價相對合宜、沒有雷射維護費用、操作使用如同螢光顯微鏡般簡單。適用於昆蟲、斑馬魚、線蟲、組織切片、細胞等各式螢光樣本觀察。
 
ZEISS Apotome原理
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ZEISS Apotome的運作是藉由兩片玻璃完成:一片蒸鍍金屬線條的玻璃與一片持續擺動的玻璃。ZEISS Apotome安裝在顯微鏡的螢光光路上,蒸鍍金屬線條的玻璃準確投射許多相互平行的水平黑線在樣品焦平面上;前方另一持續擺動的玻璃則讓準焦黑線持續在樣品上垂直來回移動。
在顯微鏡視野下這些準焦的黑線可清楚顯示樣品處於焦平面的區域,Apotome持續上下移動黑線並拍攝至少三張不同黑線位置的影像,以取得樣品上所有焦平面的影像資訊,最後在ZEISS軟體上即時呈現清晰的光學切片效果。
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ZEISS Apotome使用簡便
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雖共軛焦顯微鏡(confocal microscopy)仍為光學切片影像圭臬,然ZEISS Apotome使用簡便,將Apotome推向機身即可啟動,稍拉出機身即關閉。維護與耗材同一般螢光顯微鏡,常用耗材為螢光燈泡與高倍率物鏡浸油。熟悉螢光顯微鏡操作的人員即可操作ZEISS Apotome、即可輕易拍攝出直逼共軛焦顯微鏡的清晰影像。在有限的人員與預算下,ZEISS Apotome仍為各獨立實驗室無可取代的最佳選擇!
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